SN∕T 4624.18-2021 入境环保用微生物菌剂检测方法 第18部分：短短芽孢杆菌
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ID： |
1DED6D1151DC47388F71D421F2A1110D |
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文件大小(MB)： |
0.37 |
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20 |
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日期： |
2021-10-24 |
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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准,SN/T 4624.18—2021,入境环保用微生物菌剂检测方法,第18 部分：短短芽孢杆菌,Test method of import microbe agentia in the environment protection -,Part 18: Brevibacillus brevisr,2021-06-18 发布2022-01-01 实施,ICS 11.020,CCS C 62,中华人民共和国海关总署发 布,SN/T 4624.18—2021,I,前 言,本文件按照GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规,定起草,本文件为SN/T 4624《入境环保用微生物菌剂检测方法》的第18 部分。SN/T 4624 已经发布了以,下部分：,——第1 部分：地衣芽孢杆菌,——第2 部分：短小芽孢杆菌,——第3 部分：巨大芽孢杆菌,——第4 部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌,——第5 部分：β 型溶血性链球菌,——第6 部分：金黄色葡萄球菌,——第7 部分：沙门氏菌,——第8 部分：志贺氏菌,——第9 部分：致泻大肠埃希氏菌,——第10 部分：淡紫拟青霉,——第11 部分：雅致小克银汉霉,——第12 部分：哈茨木霉,——第13 部分：黄孢原毛平革菌,——第14 部分：焦曲霉,——第15 部分：解淀粉芽孢杆菌,——第16 部分：类产碱假单胞菌,——第17 部分：恶臭假单胞菌,——第18 部分：短短芽孢杆菌,——第19 部分：红串红球菌,——第20 部分：泛养副球菌,本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口,本部分起草单位：中华人民共和国沈阳海关、二连浩特国际旅行卫生保健中心,本部分主要起草人：王金玲、张莹、杨喜凤、罗力涵、李大力,1,SN/T 4624.18—2021,入境环保用微生物菌剂检测方法,第18 部分 短短芽孢杆菌,1 范围,本文件规定了入境环保用微生物菌剂短短芽孢杆菌（Brevibacillus brevis）的形态学鉴定、生化鉴,定、实时荧光PCR 检测方法,本文件适用于入境环保用微生物菌剂短短芽孢杆菌检测和鉴定,2 规范性引用文件,下列文件中的内容通过文件的规范性引用而构成文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文,件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适,用于本文件,GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法,3 术语和定义,本文件没有需要界定的术语和定义,4 短短芽孢杆菌分类地位,学名：Brevibacillus brevis,分类地位：芽孢杆菌科（Bacillaceae），短芽孢杆菌属（Brevibacillus）,5 方法原理,分离纯化菌株后，进行形态学鉴定、生化鉴定、实时荧光PCR 检测，根据菌的形态特征结果、,生化鉴定结果、实时荧光PCR 特异性片段扩增结果，3 项结果都符合时判断该菌是否为目标菌株,6 仪器设备,6.1 电子天平（感量0.01 g）,6.2 恒温培养箱：30 ℃ ±1 ℃、50 ℃ ±1 ℃,6.3 恒温振荡培养箱：30 ℃ ±1 ℃,6.4 恒温水浴锅,6.5 台式冷冻离心机（最高转速15 000 r/min）,6.6 PCR 扩增仪,6.7 生物显微镜：10×~100×,2,SN/T 4624.18— 2021,6.8 厌氧培养装置：30 ℃ ±1 ℃,6.9 微量移液器和灭菌吸头：10 μL、20 μL、200 μL、1 000 μL,6.10 高压灭菌锅,6.11 PCR 超净工作台,6.12 电泳仪,6.13 核酸/ 蛋白分析仪,6.14 凝胶成像系统,6.15 无菌培养皿：直径90 mm,7 主要试剂和培养基,7.1 实验用水（应符合GB/T 6682 中一级水的规格）,7.2 营养琼脂：按附录A 中A.1 配制,7.3 营养肉汤：按附录A 中A.2 配制,7.4 革兰氏染色法相关试剂：按附录A 中A.3 配制,7.5 芽孢染色法相关试剂：按附录A 中A.4 配制,7.6 接触酶：按附录A 中A.5 配制,7.7 氧化酶：按附录A 中A.6 配制,7.8 糖发酵管（葡萄糖、木糖、L- 阿拉伯糖、甘露醇）：按附录A 中A.7 配制,7.9 硝酸盐还原：按附录A 中A.8 配制,7.10 7 %NaCl 生长：按附录A 中A.9 配制,7.11 淀粉水解：按附录A 中A.10 配制,7.12 明胶：按附录A 中A.11 配制,7.13 TE 缓冲液（pH 值8.0）：按附录A 中A.12 配制,7.14 1 %~3 % 琼脂糖凝胶：按附录A 中A.13 配制,7.15 25 mM EDTA ：按附录A 中A.14 配制,7.16 3 M 醋酸钠：按附录A 中A.15 配制,7.17 dNTP ：dATP、dTTP、dGTP、dCTP 配制,7.18 TBE ：按附录A 中A.16 配制,7.19 Taq DNA 聚合酶,7.20 细菌基因组DNA 提取试剂盒,7.21 琼脂糖,7.22 溴化乙锭,7.23 DNA 分子量标记：100 bp DNA l adder,8 样品制备、培养,8.1 以无菌操作取1 g（mL）样品加入到100 mL 生理盐水中混匀，移取1 环菌连续划线接种5 个营,养琼脂平板，30 ℃ ±1 ℃培养18 h~24 h。取样过程中，在样品旁边放置1 个营养琼脂平板作为空白,对照,8.2 挑取平板上3~5 个菌落平坦、光滑，色泽白色，生长后期一般黄灰色的菌落进行形态学鉴定,8.3……
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